Microscopía de fluorescencia e imágenes celulares

La microscopía es fundamental para comprender la arquitectura de los tejidos, la estructura y la dinámica celular, así como la función molecular. La microscopía de fluorescencia se utiliza habitualmente para determinar información espacial y topológica sobre células y tejidos. La sofisticada instrumentación microscópica de escaneo láser, las cámaras digitales ultrasensibles y las sondas de fluorescencia especializadas permiten visualizar eventos celulares en tiempo real hasta el nivel molecular.

microscopio de fluorescencia en uso

El recurso compartido de microscopía de fluorescencia e imágenes celulares promueve la excelencia en la investigación del cáncer al poner a disposición instrumentación y software de última generación para imágenes de fluorescencia cuantitativas, multiescala y multimodal.

Promoción de la excelencia en la investigación del cáncer

Imagen de NueronsEl recurso compartido de microscopía de fluorescencia e imágenes celulares ayuda a los investigadores médicos y básicos a obtener imágenes de muestras y publicar artículos de alto perfil que:

  • Dilucidar los mecanismos celulares y moleculares del cáncer, enfermedades inmunológicas, infecciosas, metabólicas, neurológicas y vasculares.
  • Evaluar la eficacia terapéutica en células y muestras de pacientes.
  • Probar nuevas nanotecnologías en ensayos basados ​​en células
  • Medir cuantitativamente los cambios en la morfología y patología de los tejidos.

El recurso compartido de microscopía de fluorescencia e imágenes celulares proporciona a los investigadores de la UNM acceso a instrumentación de última generación para múltiples técnicas de microscopía de fluorescencia y luz transmitida:

  • Los microscopios de escaneo láser de fotón único y multifotónico y los sistemas de imágenes hiperespectrales permiten la visualización y cuantificación simultáneas de tinciones histoquímicas y etiquetas fluorescentes
  • Aplicaciones de fluorescencia de reflexión interna total (TIRF), seguimiento de una sola partícula (SPT) y microscopía de localización de una sola molécula (SMLM) para cuantificar eventos dinámicos de células vivas y lograr una resolución por debajo del límite de difracción de la luz
  • Las imágenes radiométricas permiten la cuantificación de cambios en tiempo real en el calcio y otras concentraciones de iones en respuesta a la señalización celular. 

El recurso compartido de microscopía de fluorescencia e imágenes celulares cuenta con personal de recursos que ofrece investigadores

  • Consulta de expertos sobre diseño de experimentos y preparación de muestras. 
  • Capacitación
  • Imágenes por una tarifa
  • Asistencia continua

Diane Lidke, PhD; Director de la facultad

Departamento de patología
2325 Camino de la Salud, CRF203A
Centro Oncológico Integral de la UNM
Albuquerque, Nuevo México 87131
Teléfono: (505) 272-8375

Envíe un correo electrónico a la Dra. Diane Lidke

Michael Paffett, PhD; Director técnico

2325 Camino de la Salud, CRF201A
Centro Oncológico Integral de la UNM
Albuquerque, Nuevo México 87131
Teléfono: 505-272-1437

Envíe un correo electrónico al Dr. Paffett

Keith Lidke, PhD; Asesor especial

210 Yale Blvd NE, 2218
Edificio de Ciencias Interdisciplinarias de Física y Astronomía
Albuquerque, Nuevo México 87106
Teléfono: (505) 277-2616

Envíe un correo electrónico al Dr. Keith Lidke

Para reconocer el uso de este recurso compartido, incluya lo siguiente en sus publicaciones:

Esta investigación fue financiada parcialmente por la Subvención de Apoyo al Centro Integral del Cáncer de la UNM NCI P30CA118100 y utilizó el recurso compartido de Microscopía de Fluorescencia e Imágenes Celulares.

Después de la publicación, envíenos una de sus reimpresiones o imágenes de portada para nuestros registros.

Instrumentación

Ubicación: CRF219

Detalles del sistema

  • Microscopio invertido personalizado Olympus IX83 con platina de escaneo piezoeléctrico Asylum 3D XYZ
  • Excelitas Turbo LED multiespectral (campo amplio) y lámpara halógena (campo claro)  
  • Objetivo de inmersión en aceite 10X/0.3NA, 20X/0.7NA y 100X/1.4NA
  • Cámara CCD monocromática Olympus XM10 
  • Cabezal Asylum MFP Origin AFM con recorrido ampliado para preparaciones biológicas
  • Software de investigación de asilo para controles AFM
  • Software Olympus cellSens para controles de microscopía óptica
  • BioHeater para trabajar con células/tejidos vivos
  • ¡Se proporcionan sondas de entrenamiento hasta agotar existencias!
  • Platos compatibles con AFM: WillCo cubre cámaras inferiores (Ted Pella cat # 14025-20) y platos de cultivo de poliestireno BD Falcon (# 351006)
  • Las superficies atómicamente planas (mica o HOPG) para escaneo de alta resolución se pueden encontrar en Ted Pella.com; solicite ayuda

Posibles aplicaciones

  • Modo de contacto alterno (CA), también conocido como Modo Tapping, para imágenes a escala nanométrica en preparaciones secas o húmedas
  • Modo de contacto para mediciones de fuerza mecánica (módulo elástico, adhesión, sangría y mapeo de fuerza) en preparaciones secas o húmedas 

Ubicación: CRF216

Detalles del microscopio

  • Microscopio invertido Leica DMi8 con platina motorizada XY
  • Lámpara de fluorescencia de haluro metálico y lámpara de transmisión halógena
  • Objetivos 10X, 20X Oil, 25X Water, 63X Water DIC y 63X Oil DIC
  • Excitación láser para fluoróforos PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, rodamina y similares a Cy5
  • Láser de luz blanca pulsada y sintonizable: 470 - 670 nm
  • Dos láseres adicionales: diodo láser de 405 nm y un argón múltiple (líneas de 458, 477, 488, 514 nm)
  • Seis detectores: 2 detectores espectrales híbridos * (HyD); 2 SMD espectrales ** HyD, 1 PMT espectral estándar y 1 PMT transmitido (externo)
  • Etapa Z de Galvo
  • Escáner de resonancia
  • Módulo de microscopía de fluorescencia de por vida (FLIM) Pico Harp 300
  • Software de adquisición LASX
  • Software FLIM SymphoTime64 (PicoQuant)
  • Software de desconvolución Huygens
  • Incubadora Tokai Hit Stage Top para imágenes de células vivas

* Los HyD son detectores especializados que utilizan fotocátodos GAsP y fotodiodos de avalancha

** Detectores de molécula única (SMD)

Posibles aplicaciones

  • Muestras fijas montadas en portaobjetos estándar con cubreobjetos n. ° 1.5
  • Muestras de células vivas (LabTekII # 1.5 de múltiples pocillos o cubierta inferior de 35 mm (# 1.5))
  • FLIM FRET (fijo o de celda viva)
  • Blanqueo del aceptador FRET (fijo)
  • Emisión sensibilizada FRET (célula viva)
  • FRAP (célula viva)
  • Adquisición 3D (Z-Stacks) e imágenes de lapso de tiempo
  • Desmezcla multiespectral
  • Escaneos de mosaicos multidimensionales de gran área
  • Súper resolución a través del procesamiento de restauración de imágenes (~ 130 nm)

Ubicación: CRF226

Detalles del microscopio

  • Microscopio invertido Zeiss AxioObserver con platina motorizada XY
  • Lámpara fluorescente de halogenuros metálicos y lámpara de transmisión halógena
  • Objetivos de inmersión 10x, 20x, 40x aceite, 63x aceite y 63x de inmersión en agua
  • DIC disponible con objetivos 10x, 20x, 40x y 63x
  • Excitación láser para fluoróforos PA-GFP, DAPI, CFP, YFP, FITC, rodamina y similares a Cy5
  • Cuatro láseres de estado sólido: 405 nm, 488 nm, 561 nm, 640 nm
  • Detección de canales y espectros: detectores PMT de GaAsP
  • Detección simultánea en 3 canales disponibles en modo Canal
  • Detector de matriz Airyscan para un aumento de 1.7 veces en la resolución XY
  • Detector de luz transmitida
  • Sistema de incubación de células vivas: control de temperatura, humedad y CO2
  • Software de adquisición de imágenes Zen Blue

Posibles aplicaciones

  • Muestras fijas montadas en portaobjetos estándar con cubreobjetos n. ° 1.5
  • Muestras de células vivas (LabTekII # 1.5 de múltiples pocillos o cubierta inferior de 35 mm (# 1.5))
  • Blanqueo del aceptador FRET (fijo)
  • Emisión sensibilizada FRET (célula viva)
  • FRAP (célula viva)
  • Adquisición 3D (Z-Stacks) e imágenes de lapso de tiempo
  • Desmezcla multiespectral
  • Escaneos de mosaicos multidimensionales de gran área
  • Súper resolución a través del procesamiento de restauración de imágenes (~ 130 nm)

Ubicación: CRF226

Detalles del microscopio

  • Microscopio invertido Olympus IX83 personalizado con platina XY motorizada ASI con inserto Z piezoeléctrico.
  • LED multiespectral Excelitas Turbo (campo amplio) y LED blanco Lumencor (campo brillante)  
  • Objetivos de aceite 20x / 0.8NA, aceite TIRF 60x / 1.5NA, agua 60x / 1.2NA y aceite 100x / 1.4NA
  • Compatible con DIC para ópticas de 60x y 100x.
  • Controlador de tiempo real de Olympus para sincronización de excitación y cámara con precisión temporal
  • Iluminador MITICO TIRF de 4 líneas láser para profundidades de penetración independientes
  • 4 líneas láser individuales para TIRF: 405 nm (100 mW); 488 nm (100 mW); 561 nm (100 mW) y 640 nm (140 mW)
  • Es posible obtener imágenes con microscopía de reconstrucción óptica estocástica directa (dSTORM), microscopía de localización fotoactivada (PALM) y óptica laminar altamente inclinada (HILO)
  • Cámara sCMOS Hamamatsu Fusion y divisor de imágenes Geminini W-View para adquisiciones simultáneas de células en vivo de 2 colores.
  • Enfoque automático IR ZDC2 no fotodestructivo para capacidades de enfoque automático continuo o de un disparo extremadamente rápido 
  • Calentador objetivo de BiopTechs para aplicaciones de células vivas a corto plazo
  • Software de adquisición de imágenes Olympus cellSens Dimension

Posibles aplicaciones

  • Muestras fijas con cubreobjetos # 1.5H
  • Muestras de células vivas (LabTekII # 1.5H de múltiples pocillos o cubierta inferior de 35 mm (# 1.5H))
  • Adquisición 3D (Z-Stacks) e imágenes de lapso de tiempo
  • Las aplicaciones específicas incluyen detección de molécula única TIRF de células vivas, HILO, 2D dSTORM o PALM 
  • Posprocesamiento habilitado para GPU proporcionado por Huygens Localizer

Ubicación de la cámara: CRF218

Detalles del microscopio

  • Microscopio invertido Olympus IX-71 invertido
  • Lámpara de fluorescencia de mercurio y lámpara de transmisión halógena
  • Monocromador: rango de excitación de 350 nm a 670 nm
  • Láseres: 405nm, 488nm, 520nm y 642nm
  • Objetivos TIRF 20x, 60x H2O, 100x Oil, 150x Oil
  • Filtros de fluorescencia para Quantum Dots, DAPI, FITC y fluoróforos tipo Rhod, Fura-2, Indo-1
  • Software de adquisición de imágenes Andor IQ
  • Calentador objetivo y dispositivos de patología sistema de incubación de células vivas con CO2, calor, humedad
  • Etapa motorizada XYZ
  • Cámara Andor iXon EM-CCD
  • Divisor de imagen Opti-split (dual)

Posibles aplicaciones

  • Muestra fija montada en portaobjetos
  • Imágenes de células en vivo con calentador de objetivos
  • Seguimiento de una sola partícula
  • Fluorescencia de reflexión interna total (TIRF)
  • Imágenes de relación métrica (excitación dual / emisión única o emisión dual de excitación única)
  • Células vivas en cultivo
  • Fluorescencia de campo amplio: muchos fluoróforos posibles con monocromador
  • Pilas Z y series de tiempo

Ubicación de la cámara: CRF224

Detalles del microscopio

  • Microscopio vertical AxioPlanMOT
  • Lámpara de fluorescencia de halogenuros metálicos y lámpara de transmisión halógena
  • Objetivos 10x, 20x, 40x Oil y 63x Oil
  • Filtros de paso largo DAPI, FITC, Rhodamine, Cy5 para usar con la cámara Nuance y la cámara espectral y el software Nuance
  • Portaobjetivos motorizados, etapa Z, torreta de filtro y obturador para una fácil operación.

Posibles aplicaciones

  • Muestra fija montada en portaobjetos
  • Fluorescencia de campo amplio: muestra etiquetada con fluoróforos similares a DAPI, FITC, Rhod y Cy5
  • Brightfield: H&E, DAB, Giemsa, etc.
  • La cámara espectral de matices se puede utilizar para separar fluoróforos muy superpuestos, tinciones histoquímicas, distinguir autofluorescencia y cuantificar el etiquetado

Ubicación de la cámara: CRF212

Detalles del microscopio 

  • Microscopio de fluorescencia invertido Zeiss AxioObserver
  • Cámara monocromática Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS (100 fps a resolución completa 2048x2048)
  • Lámpara fluorescente de halogenuros metálicos y lámpara de transmisión halógena
  • Objetivos 10x, 20x, 63xDIC Oil y 100x Oil
  • Contraste de fase para objetivos 10x y 20x
  • Los juegos de filtros de fluorescencia incluyen: DAPI, FITC, Rhodamine / TRITC / Cy3, Texas Red & Cy5
  • DIC disponible con objetivos 63x
  • Calentador de objetivo (objetivo de agua 63x) o Portaobjetivos motorizado para apilamiento en Z
  • Etapa XY motorizada para la adquisición de imágenes de múltiples posiciones (imágenes de lapso de tiempo de celda fija o en vivo)
  • Software de adquisición de imágenes SlideBook6

Posibles aplicaciones 

  • Muestra fija montada en portaobjetos
  • Células vivas en plato de cubreobjetos / calentamiento con calentador objetivo
  • DIC (no confocal) con objetivos de 63x, combinado con fluorescencia o solo
  • Imágenes de series de tiempo, montaje y pilas en Z

Ubicación de la cámara: CRF226

Detalles del microscopio

  • Microscopio vertical AxioSkop 2 MOT
  • 4x, 10x, 20x, 40x, 40x Aceite y 63x Aceite
  • Contraste de fase para objetivos 10x y 20x
  • Cámara digital en color AxioCam HR
  • Software de adquisición de imágenes Zeiss AxioVision
  • Etapa Z motorizada

Posibles aplicaciones

  • Muestra fija montada en portaobjetos para histopatología general
  • Brightfield: H&E, DAB, Giemsa, etc.

Ubicado en CRF224 y CRF226

Software

  • Imágenes de volumen científico de deconvolución Huygens (1)
  • Libro de diapositivas (1)
  • EstereoInvestigador (1)
  • neurolucida (1)
  • LASX (Leica confocal) (1)
  • IQTL (análisis de escáner de tifones) (1)
  • zen (2)  
  • LSM510 (2)
  • Software de imágenes espectrales Nuance (2)

Opciones de analisis

  • Co-localización
  • Desconvolución
  • Desmezcla espectral
  • Análisis de intensidad
  • Análisis morfológico
  • Representación 3D
  • Conteo de objetos
  • Seguimiento de partículas
  • Preparación para publicación

Ubicado en CRF214

Typhoon FLA 7000 es un escáner láser rápido y versátil para aplicaciones de imágenes biomoleculares que incluyen:

  • mediciones sensibles y cuantitativas de marcadores radioisotópicos
  • Western blots quimifluorescentes
  • fluorescencia simple (excitación visible)
  • documentación de tinciones colorimétricas (p. ej., geles teñidos con azul de Coomassie y plata)

Ubicado en CRF214

Li-Cor Odessey Fc es un escáner de infrarrojo cercano (680 nm y 740 nm) para aplicaciones de imágenes biomoleculares que incluyen:

  • mediciones sensibles y cuantitativas de Western blots quimioluminiscentes
  • documentación de tinciones colorimétricas (p. ej., geles teñidos con azul de Coomassie y plata)

Los servicios de microscopía incluyen

  • Consulta de expertos sobre diseño de experimentos y preparación de muestras.
  • Entrenamiento de usuario
  • Imágenes asistidas por el operador y adquisición de datos preliminares para solicitudes de subvenciones.
  • Casa abierta anual para informar a los usuarios de las actualizaciones sobre nueva instrumentación, tecnologías y aplicaciones
  • Curso de microscopía para estudiantes graduados y becarios en óptica y funcionalidades de instrumentos.
  • Talleres anuales que brindan capacitación práctica a los nuevos usuarios en la preparación de muestras.

FasLGFP en reposo Acquisition_20201113_165
Microscopía de fluorescencia de reflexión interna total (TIRF) de la expresión de actividad basal FasL-GFP en células RBL

Servicios y tarifas de microscopía

Zeiss AxioSkop - Cámara en color AxioCamHR: $ 10 / hora

Zeiss AxioObserver - Cámara monocromática Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS: $ 18 / hora

Zeiss AxioPlan2 - Cámara multiespectral Nuance: $ 10 / hora

Nikon TE2000 - Cámara monocromática Q-Imaging Retiga R3: $ 10 / hora

Leica TCS SP8 confocal con detección de molécula única / FLIM: $ 54 / hora

Zeiss LSM 800 AiryScan: $ 50 / hora

Imágenes de seguimiento de partículas individuales / relación de fluorescencia (Rm.218): $ 25 / hora

Sistema de estereología confocal (Salón 212): $ 30 / hora

Microscopía de fuerza atómica (salón 219): $30/hora

Imágenes de epifluorescencia: $ 75 / hora

Imágenes de fluorescencia confocal: $ 100 / hora (4 horas)

Microscopio Olympus e imágenes espectrales: $ 75 / hora (2-6 horas)

Todas las modalidades de imágenes: $ 105 / hora

Financiamiento de instalaciones

El recurso compartido de microscopía de fluorescencia de la Universidad de Nuevo México y el Centro Oncológico reconoce los siguientes fondos para la compra de instrumentación o el apoyo a las instalaciones desde su apertura en 1999.

Financiamiento actual

NCI 2P30 CA118100 (PI Willman, C.) “Subvención de apoyo al centro oncológico de UNM” 9/25 / 05- 8/31/20

NIGMS 5P50 GM085273 (PI Wilson, BS) “Centro para el modelado espacio-temporal de redes de señalización celular (STMC)” 08/01 / 08-07 / 31/19

STMC P50GM085273: apoyo financiero para Leica TCS-SP8 y Olympus iX71

Financiamiento de instrumentación anterior

NCRR 1 S10 RR14668 (PI Wandinger-Ness, A.) “Un microscopio confocal Zeiss LSM510 para la investigación en ciencias de la salud” 04/01 / 00-03 / 31/01

NSF MCB9982161 (PI Wandinger-Ness, A.) "Rab7 y la función de proteínas accesorias en la endocitosis tardía" (Compra de una cámara digital Hamamatsu para imágenes de células vivas) 04/01 / 00-03 / 31/06

NCRR S10 RR016918 (PI Wandinger-Ness, A.) “Zeiss Axiovert 200 for Live Cell Imaging Project” 08/01 / 02-04 / 01/04

NCRR S10 RR19287 (PI Wandinger-Ness, A.) “Detector META y láser de 405 nm” 04/01 / 04-03 / 31/05

NCRR 1S10RR025540 (PI Wandinger-Ness, A., co-I Lee, R.) “Un microscopio de estereología confocal para el núcleo de microscopía de fluorescencia de UNM” ARRA 05/01 / 09-03 / 31/10

NSF DGE-0549500 (PI Osinski, M. co-I, Oliver Co-PI) “Nanotecnología para biología celular y neurociencia” (Compra de accesorios para Olympus IX71) 6/15 / 06-5 / 31/11

Matthews Family Fund (PI Lee, R.) “Sistema de imágenes espectrales de Nuance, Cri” 01/01 / 09-12 / 31 / -09

NIDDK 3R301 DK050141 (PI Wandinger-Ness, A.) “Mecanismos patológicos de la enfermedad renal poliquística” Adquisición de Zeiss Axio Observer para 510 META) Suplemento administrativo de ARRA 09/30 / 09-09 / 29/11

NCRR P20 RR11830 (PI Oliver, J., co-PI Eaton, P.) “Mejora de la investigación multidisciplinaria en Nuevo México” 9/30/96 - 9/29/99

NCI R24 CA88339 (PI Sklar, L.) “Un recurso compartido para la investigación del cáncer de la UNM” 07/01 / 00-06 / 30/05

NCI P20 CA88807 (PI Willman, C.) “Beca de planificación del centro de cáncer de la Universidad de Nuevo México” 07/01 / 00-06 / 30/05

Financiamiento intramuros 1999-presente: $ 437,266

Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Nuevo México

Centro de Cáncer de la Universidad de Nuevo México

Departamento de Patología de la Facultad de Medicina de la Universidad de Nuevo México